PGD
Preimplantační genetická diagnostika (PGD)
Zahrnuje soubor vyšetřovacích metod umožňujících popsat genetický stav embrya.
Všeobecně využívá PGD 2 přístupy:
1. na úrovni chromozomů sledujeme početní a strukturní změny chromozomů;
technika Fluorescenční in situ hybridizace (FISH) a technika DNA čipů (aCGH)
2. na úrovni genů odhalíme choroby, jejichž příčinou je změna v jednom genu tzv. monogenní choroby; technika Polymerázové řetězové reakce (PCR)
Příslušné techniky jsou indikovány na základě diagnózy pacienta.
Technika FISH nebo aCGH je indikována v případě, kdy je pacientka vyššího věku, opakovaně potrácí či jsou v rodině zjištěny chromozomové přestavby např. translokace. Metody FISH a aCGH umožňují najít změny v počtu a struktuře chromozomů, které by mohly vést ke vzniku vrozených vývojových vad a jiných onemocnění.
Metoda PCR slouží ke studiu a analýze konkrétního, již v rodině zjištěného, monogenního nemocnění (např. Huntingtonova chorea, cystická fibróza, polycystické ledviny, tuberózní skleróza a mnoho dalších).
více o PGD metodách níže...
Jak se PGD provádí?
PGD je vázána na umělé oplození (IVF).
Po odběru vajíček, jejich oplození a 5-6 denní kultivaci, je na vhodných embryích provedena biopsie (je odbráno několik buněk) - viz obrázek níže a video na YouTube
Tyto odbioptované buňky jsou následně, již předem vybranou technikou, testovány (FISH, aCGH, PCR). Zdravá embrya jsou zavedena (transferována) pacientce do dělohy nebo jsou zamražena a tak uchována pro další použití.
Předností Sanatoria Helios Brno, v tomto ohledu, je biopsie embryí ve stádiu blastocysty tj. po pětidenní (šestidenní) kultivaci. Biopsii blastocyst provedlo Sanatorium Helios jako první IVF centrum v Evropě. Hlavní výhoda spočívá v tom, že na rozdíl od biopsie třídenních embryí, kdy je možné vyšetřit pouze 1-2 buňky, získáme biopsií 5. (6. den) více kvalitního materiálu (3-6 buněk) potřebného k vyšetření a tím je vyšetření přesnější. Při použití metody FISH a aCGH je tak možné zachytit i mozaicismus – rozdílnou genetickou výbavu v jednotlivých buňkách.
Video: Biopsie zcela vyhatchované blastocysty (FHB) u nás v laboratoři.
Navíc pětidenní (šestidenní) kultivace umožňuje vybrat ta nejkvalitnější embrya, která mají vysokou pravděpodobnost nidace (uhnízdění v děloze).
PGD v kombinaci s kvalitním IVF programem nabízí unikátní alternativu prenatální diagnostiky a je v mnoha ohledech pro pacientky šetrnější.
Metody PGD v Sanatoriu Helios dlouhodobě zvyšují úspěšnost více než o 15%.
Fluorescenční in situ hybridizace (FISH): molekulárně cytogenetická metoda, která umožňuje odhalit početní nebo strukturní změny chromozomů díky využití barevných značek. Obarvit lze celé chromozomy nebo jejich konkrétní části, tedy úseky DNA. Jako barvivo se používají tzv. fluorochromy. Výsledek je pak hodnocen ve fluorescenčním mikroskopu. V rámci PGD jsou analyzovány chromozomy 13, 18, 21 a pohlavní chromozomy X a Y.
Technika DNA čipů (aCGH): molekulárně cytogenetická metoda, která umožňuje analyzovat celý genom v rámci PGD (všechny chromozomy embrya) v jediné analýze a odhalit tak početní nebo strukturní změny chromozomů. DNA embrya je označena barevnými značkami a intenzita barvy těchto značek je pak srovnána s intenzitou barvy značek na kontrolní DNA. Poměr intenzit těchto barev je pak pomocí speciálního počítačového programu vyhodnocen a stanoven výsledek.
Polymerázová řetězová reakce (PCR): molekulárně biologická metoda, jedná se o rychlé a snadné zmnožení vybraného úseku DNA. PCR slouží k vytvoření až mnoha milionů kopií určitého úseku DNA, což umožňuje provést analýzu DNA i z velmi malého množství vstupního materiálu (např. jedna či několik buněk embrya). Následně je pak možné provést vazebnou analýzu, která je v rámci PGD specifická pro danou rodinu a chorobu.
